HYDS0034-100T 四色多重免疫荧光丝瓜绿巨人黑科技破解（三标四色）
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产品名称：HYDS0034-100T 四色多重免疫荧光丝瓜绿巨人黑科技破解（三标四色）
产品型号：HYDS0034-100T
产品厂商：上海绿巨人api破解版黑科技官网生物科技有限公司
简单介绍
产品名称：四色多重免疫荧光丝瓜绿巨人黑科技破解（三标四色）?，免疫荧光(immunofluorescence，IF)，通常是指用荧光标记的抗体示踪或检查样品中相应抗原的方法。根据抗原抗体反应，将不影响抗原抗体相互作用的荧光分子标记在抗体上，与其相应的抗原反应后，在荧光显微镜下针对荧光标记分子的激发光发射光进行观察，从而检测目的指标的相
HYDS0034-100T 四色多重免疫荧光丝瓜绿巨人黑科技破解（三标四色）的详细介绍
免疫荧光(immunofluorescence，IF)，通常是指用荧光标记的抗体示踪或检查样品中相应抗原的方法。根据抗原抗体反应，将不影响抗原抗体相互作用的荧光分子标记在抗体上，与其相应的抗原反应后，在荧光显微镜下针对荧光标记分子的激发光发射光进行观察，从而检测目的指标的相对含量、在组织细胞中的定位。
产品名称：四色多重免疫荧光丝瓜绿巨人黑科技破解（三标四色）
原理介绍:酪酰胺信号放大(TSA，Tyramidesignalamplification)技术是一类利用辣根过氧化酶（HRP）对靶蛋白进行标记的酶学检测方法，类似常规免疫组化的DAB显色方法，TSA 技术同样采用HRP标记的二抗，同样有对应的“显色”步骤（HRP催化加入反应体系的酪胺荧光素底物，产生活化荧光底物，活化底物可与抗原上的酪氨酸等残基共价结合，使样品上稳定的共价结合酪胺荧光素。之后用热修复法洗去非共价结合的一抗-二抗-HRP复合物，重复下一种一抗-hrp二抗来第二轮孵育，换另一种酪胺荧光素底物，如此往复就可实现多重标记。
TSA详细原理是利用酪胺Tyramide的过氧化物酶反应(酪胺盐在HRP催化H202下形成共价键结合位点)，产生大量的酶促产物，该产物能与周围的蛋白残基(包括色氨酸、组氨酸和酪氨酸残基)结合，这样在抗原-抗体结合部位就有大量的荧光素沉积，结果使其检测信号得到10-100倍增强。简单来说，用这种方法做多重免疫荧光是利用二抗上带有的HRP（而不是直接偶联荧光素），来催化后续添加入体系的非活性荧光素。荧光素在HRP和过氧化氢的作用下被活化，跟临近蛋白的酪氨酸残基共价偶联，使得蛋白样品与荧光素稳定结合。然后微波或煮沸或者水浴等热修复处理，前一轮非共价结合的抗体被洗掉，共价结合的荧光素稳定共价结合在样本切片蛋白上。再换个一抗来第二轮孵育，周而复始。等到所有抗体孵育结束，荧光素都结合好后，最后去检测结果。由于每次体系中都只有单一抗体孵育，因此无需担心抗体交叉反应，以及一抗二抗种属匹配问题，大大减少了实验设计时不同种属抗体选择匹配的限制。也就是说，如果用TSA技术，同一张片子上所有的靶标都可以选用特异性高的兔单克隆抗体。搭配同一支抗兔的HRP二抗就可以进行实验，而且信号放大的倍数大大增强。本公司开发的丝瓜绿巨人黑科技破解具体酪胺荧光染料为以下其中一种或者多种：480，520，570，620，690，780，488，CY3.此丝瓜绿巨人黑科技破解中的荧光染料可单独或配合使用。可以实现单标、双标、三标以及更多重荧光放大/多重同源抗体荧光标记等功能，极大丰富了此丝瓜绿巨人黑科技破解的内涵。
原理介绍:酪酰胺信号放大(TSA，Tyramidesignalamplification)技术是一类利用辣根过氧化酶（HRP）对靶蛋白进行标记的酶学检测方法，类似常规免疫组化的DAB显色方法，TSA 技术同样采用HRP标记的二抗，同样有对应的“显色”步骤（HRP催化加入反应体系的酪胺荧光素底物，产生活化荧光底物，活化底物可与抗原上的酪氨酸等残基共价结合，使样品上稳定的共价结合酪胺荧光素。之后用热修复法洗去非共价结合的一抗-二抗-HRP复合物，重复下一种一抗-hrp二抗来第二轮孵育，换另一种酪胺荧光素底物，如此往复就可实现多重标记。
TSA详细原理是利用酪胺Tyramide的过氧化物酶反应(酪胺盐在HRP催化H202下形成共价键结合位点)，产生大量的酶促产物，该产物能与周围的蛋白残基(包括色氨酸、组氨酸和酪氨酸残基)结合，这样在抗原-抗体结合部位就有大量的荧光素沉积，结果使其检测信号得到10-100倍增强。简单来说，用这种方法做多重免疫荧光是利用二抗上带有的HRP（而不是直接偶联荧光素），来催化后续添加入体系的非活性荧光素。荧光素在HRP和过氧化氢的作用下被活化，跟临近蛋白的酪氨酸残基共价偶联，使得蛋白样品与荧光素稳定结合。然后微波或煮沸或者水浴等热修复处理，前一轮非共价结合的抗体被洗掉，共价结合的荧光素稳定共价结合在样本切片蛋白上。再换个一抗来第二轮孵育，周而复始。等到所有抗体孵育结束，荧光素都结合好后，最后去检测结果。由于每次体系中都只有单一抗体孵育，因此无需担心抗体交叉反应，以及一抗二抗种属匹配问题，大大减少了实验设计时不同种属抗体选择匹配的限制。也就是说，如果用TSA技术，同一张片子上所有的靶标都可以选用特异性高的兔单克隆抗体。搭配同一支抗兔的HRP二抗就可以进行实验，而且信号放大的倍数大大增强。本公司开发的丝瓜绿巨人黑科技破解具体酪胺荧光染料为以下其中一种或者多种：480，520，570，620，690，780，488，CY3.此丝瓜绿巨人黑科技破解中的荧光染料可单独或配合使用。可以实现单标、双标、三标以及更多重荧光放大/多重同源抗体荧光标记等功能，极大丰富了此丝瓜绿巨人黑科技破解的内涵。
产品名称：四色多重免疫荧光丝瓜绿巨人黑科技破解（三标四色）
丝瓜绿巨人黑科技破解组成：488荧光染料(绿光)(即用型，5mL),-20℃；CY3荧光染料（红光）(即用型，5mL)，-20℃；TSA+增强剂，100ul，-20℃（可选）；
高敏多聚hrp山羊抗兔二抗（5mL）4℃。
备注：488荧光染料、CY3荧光染料在-20度下，均为固体，使用之前需解冻。
TSA+增强剂使用方法：TSA+增强剂能够进一步增强荧光信号放大液的放大信号5-10倍，TSA+增强剂：荧光放大液=1:500，使用TSA+增强剂不是必须的选项，可以根据具体的情况选择添加
或者不选择添加。
操作流程：
1、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ。取出放在通风厨内，酒精晾干后放入自来水中稍洗，蒸馏水洗。
2、抗原修复：组织切片置于盛满PH9.0EDTA碱性抗原修复液或者PH6.0柠檬酸修复缓冲液的修复盒中于微波炉内进行抗原修复（也可以用高压1-2min100度水煮15min95度水浴20min等其他热修复方法）。中火8min，停火8min，转中低火7min，此过程中应防止缓冲液过度蒸发，切勿干片。自然冷却后将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。(修复液和修复条件根据组织类型以及抗原类型来确定）。
3、阻断内源性过氧化物酶：切片放入3%过氧化氢溶液，室温避光孵育15min，将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。
4、BSA封闭:切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈（防止抗体流走），在圈内滴加用3%BSA-PBS（或者其他封闭液）均匀覆盖组织，室温封闭30min。
5、加一抗：轻轻甩掉封闭液，在切片上滴加用抗体稀释液稀释好的的一抗X，切片平放于避光湿盒内4°C孵育过夜或者37度1-2h。（湿盒内加少量水防止抗体蒸发）
6、加hrp二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加与一抗相应种属的hrp二抗覆盖组织，避光室温孵育50min，PBS洗三次。
7、荧光染料反应：488荧光染料（或者CY3荧光染料）反应10-15min，PBS洗三次。
8、重复2-7步骤（换用另外一种荧光染料）
9、DAPI复染细胞核：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加DAPI染液，避光室温孵育10min。
10、封片：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片。
11、镜检拍照：切片于荧光显微镜/共聚焦/多通道荧光扫描仪/多光谱成像系统下观察并采集图像。
| 染料 | 激发波长 | 发射波长 |
| DAPI蓝色 | 350 | 420 |
| 480 | 450 | 480 |
| 488绿色 | 480-490 | 512-520 |
| CY3红色 | 530-550 | 570-590 |
| 520绿色 | 490 | 520 |
| 570红色 | 550 | 570 |
| 620 | 590 | 620 |
| 690 | 630 | 690 |
| 780 | 750 | 780 |
产品名称：四色多重免疫荧光丝瓜绿巨人黑科技破解（三标四色）
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