48t/96t 鸡骨成型蛋白4(BMP4)ELISA丝瓜绿巨人黑科技破解操作说明书

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中文名：鸡骨成型蛋白4(BMP4)ELISA丝瓜绿巨人黑科技破解
供应商：上海绿巨人api破解版黑科技官网
保存：2-8℃
有效期：6个月
检测原理：狗胆囊收缩素(CCK)ELISA丝瓜绿巨人黑科技破解采用双抗体夹心ABC-ELISA法
用途：用于测定血清，血浆及相关液体样本中相关含量或活性。
特点：敏感性高、特异性强、重复性好、试剂稳定、易保存，操作简便。
检测目的:用于测定血清，血浆及相关液体等样本，例如适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本。
ELISA方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定。但ELISA测定中影响因素较多，而且其操作中有一定的技术要求，在检测过程中除正常反应外，有时常见到一些错误的结果。
引起ELISA测定错误结果的原因主要有：
①标本因素；
②试剂因素；
③操作因素。


鸡骨成型蛋白4(BMP4)ELISA丝瓜绿巨人黑科技破解说明：
1．丝瓜绿巨人黑科技破解保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。


实验原理：
用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗该指标抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗该指标抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的该指标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。


鸡骨成型蛋白4(BMP4)ELISA丝瓜绿巨人黑科技破解标本的采集与保存：
1.  血清：
将收集于血清分离管的全血标本在室温放置 2 小时或 4oC 过夜，然后 1000×g 离心 20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20oC 或-80oC 保存，但应避免反复冻融。
2.  血浆：
用 EDTA 或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的 30 分钟内于 2-8oC 1000×g 离心 15 分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20oC 或-80oC 保存，但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆：
1） 取适量组织块，于预冷PBS（0.01mol/L, pH 7.0-7.2）中清洗去除血液，称重后备用（组织块较大需先剪碎后再匀浆）；
2） 可同时选用多种匀浆方法达到较好的破碎效果：先将组织块移入玻璃匀浆器，加入5-10mL 预冷PBS 进行充分研磨，该过程需在冰上进行（有条件实验室可选用机器匀浆）；得到的匀浆液可再利用超声破碎或反复冻融 进一步处理（超声破碎过程中注意冰浴降温；反复冻融法可重复2 次）。
3） 将制备好的匀浆液于5000×g 离心5 分钟，留取上清即可检测。
4. 细胞裂解液：
1）贴壁细胞需要先用胰酶消化，离心收集细胞（悬浮细胞可直接离心收集）；
2）将收集到的细胞用冷PBS 洗3 次；
3）物理方法裂解细胞（可先超声破碎细胞，再反复冻融）：
i 超声破碎：取适量PBS 重悬细胞，用一定功率的超声波处理细胞悬液，使细胞急剧震荡破裂。
ii 反复冻融：将待破碎的细胞在-20 oC 以下冰冻，室温融解，反复3 次，使细胞溶胀破碎。
4）将标本于2-8 oC 1500×g 离心10 分钟，收集上清备用。
5. 细胞培养上清或其它生物标本：
请 1000×g 离心 20 分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20oC 或-80oC 保存，但应避免反复冻融。


鸡骨成型蛋白4(BMP4)ELISA丝瓜绿巨人黑科技破解操作说明书操作步骤：
（1）待测样品孔中每孔加入待测样品100μl，每种样品设3个平行孔；设两个阴性对照孔，每孔加未处理组的细胞裂解液100μl；另设一个空白对照孔，加入纯细胞裂解液100μl。 
（2）酶标板置4℃，包被过夜。
（3）洗板：吸干孔内反应液，用洗涤液过洗一遍（将洗涤液注满板孔后，即甩去），之后将洗涤液注满板孔，浸泡1-2分钟，间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
（4）阴性对照孔每孔加入PBS 50μl，样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。 
（5）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）。 
（7）每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。 
（8）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）。 
（10）每孔加TMB显色液 100μl，轻轻混匀10s，置37℃暗处反应15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。 
（12）分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，终测得的OD值为两者之差（W1-W2），以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
（13）数据处理：在得出标本（S）和阴性对照（N）的 OD值后，计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。


鸡骨成型蛋白4(BMP4)ELISA丝瓜绿巨人黑科技破解注意事项：
1.使用前 TMB 显色液应为无色透明溶液，若发现颜色异常，请及时与厂家联系。
2.用户在初次使用丝瓜绿巨人黑科技破解时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。
3. 丝瓜绿巨人黑科技破解从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
4.建议所有标准品、样本都做双份检测。标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5.要严格避免操作过程中酶标板干燥。干燥会使酶标板上生物成份迅速失活！
6.为免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和试管。
7.禁止混用不同批次丝瓜绿巨人黑科技破解内的试剂。
8.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
9.为避免酶标板在恒温箱中由于温度的不匀所带来的边缘效应（位于边缘的孔总是反应强 一些），已稀释好的 ABC 和 TMB 显色液在加入酶标板孔前都应预先在 37℃中平衡至少 30 分钟。
10.各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
11.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
12.底物请避光保存。
13.严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
14.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
15.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。


鸡骨成型蛋白4(BMP4)ELISA丝瓜绿巨人黑科技破解操作说明书实验流程：
1.实验前标准品、试剂及样本的准备；
2.加样（标准品及样本）50μL，37℃孵育30分钟；
3.洗板5次，加酶标试剂50ul，37℃孵育半小时；
4.洗板5次；加入显色液A，B各50ul,37℃孵育显色15分钟
5.加终止液50μL，立即450nm读数。
6.计算

特异性：
本丝瓜绿巨人黑科技破解用于检测鸡骨成型蛋白4(BMP4)，经检测与其它相似物质无明显交叉反应。
由于受到技术及样本来源的限制，不可能完成对所有相关或相似物质交叉反应检测，因此本丝瓜绿巨人黑科技破解有可能与未经检测的其它物质有交叉反应。